Bleu de trypan

Bleu de trypan
Général
Nom IUPAC	3,3'-[(3,3'-diméthyl[1,1'-biphényl]-4,4'-diyl)bis(azo)]bis[5-amino-4-hydroxynaphtalène-2,7-disulfonate] de tétrasodium
Synonymes	C.I. 23850 C.I. Direct Blue 14
No CAS	72-57-1
No EINECS	200-786-7
PubChem	5904246
SMILES	c12c(cc(S(=O)(=O)[O-])c(c1O)\N=N\c1c(cc(c3cc(c(\N=N\c4c(cc5cc(S(=O)(=O)[O-])cc(c5c4O)N)S(=O)(=O)[O-])cc3)C)cc1)C)cc(S(=O)(=O)[O-])cc2N.[Na+].[Na+].[Na+].[Na+] PubChem, Vue 3D
InChI	InChI : Vue 3D InChI=1/C34H28N6O14S4.4Na/c1-15-7-17(3-5-25(15)37-39-31-27(57(49,50)51)11-19-9-21(55(43,44)45)13-23(35)29(19)33(31)41)18-4-6-26(16(2)8-18)38-40-32-28(58(52,53)54)12-20-10-22(56(46,47)48)14-24(36)30(20)34(32)42;;;;/h3-14,41-42H,35-36H2,1-2H3,(H,43,44,45)(H,46,47,48)(H,49,50,51)(H,52,53,54);;;;/q;4*+1/p-4/b39-37+,40-38+;;;;
Propriétés chimiques
Formule brute	C34H28N6Na4O14S4  [Isomères]
Masse molaire[1]	964,837 ± 0,055 g·mol-1 C 42,32 %, H 2,93 %, N 8,71 %, Na 9,53 %, O 23,22 %, S 13,29 %,
Propriétés physiques
T° fusion	> 300 °C[2]
Précautions
Directive 67/548/EEC
T
Symboles : T : Toxique Phrases R : R45 : Peut provoquer le cancer. Phrases S : S45 : En cas d’accident ou de malaise, consulter immédiatement un médecin (si possible, lui montrer l’étiquette). S53 : Éviter l’exposition - se procurer des instructions spéciales avant l’utilisation.
Phrases R : 45,
Phrases S : 45, 53,
Écotoxicologie
DL50	328 mg·kg-1 (souris, i.v.)[3] 267 mg·kg-1 (souris, s.c.)[4]
LogP	-0,120[2]
Unités du SI & CNTP, sauf indication contraire.

Le bleu de trypan est un colorant vital utilisé pour colorer sélectivement les tissus ou cellules morts. C'est un colorant azoïque.

Le bleu de trypan est aussi connu sous le nom de bleu diamine et de bleu Niagara.

Chimie

Le bleu de trypan est dérivé de la ditoluidine (C₁₄H₁₆N₂). Le bleu de trypan est ainsi nommé car il tue les trypanosomes, parasites entre autres responsables de la maladie du sommeil. Un analogue du bleu de trypan, la suramine est utilisé en pharmacie contre la trypanosomiase.

Le rouge de trypan et le bleu de trypan furent synthétisés la première fois par la chimiste allemand Paul Ehrlich en 1904.

Coloration au bleu de trypan

Principe

La coloration au bleu de trypan est une méthode de coloration des cellules mortes. Elle utilise le bleu de trypan qui a tendance à entrer dans les cellules qu'il rencontre. Une fois dans la cellule, la molécule en question entraîne un mécanisme d’exclusion qui va éjecter cette molécule dans le milieu extérieur. Ce mécanisme nécessitant de l’énergie, seules les cellules possédant une source d’ATP peuvent le mettre en place. Ainsi, une cellule vivante expulsera la molécule et restera blanche au microscope, au contraire une cellule morte n’aura pas les moyens de la rejeter et deviendra bleue.

Une autre explication réside dans le fait que chez une cellule vivante, la membrane intacte empêche l'entrée de la coloration dans le cytoplasme, alors qu'au contraire chez une cellule morte, la membrane lésée laisse passer le colorant ce qui aboutit à la coloration de la cellule en bleu.

Cependant, cette molécule étant toxique, elle finit par tuer les cellules qui deviennent alors toutes bleues.

Utilisation

Observation au microscope optique de Hyaloperonospora parasitica dans une feuille d'Arabidopsis thaliana en utilisant une coloration au bleu de trypan.

Cette méthode est couramment utilisée lors de numération cellulaire. On utilise alors un hémacytomètre afin de compter les cellules dans un volume précis.

On peut également utiliser cette coloration pour visualiser les cellules mortes et les hyphes de champignon et Stramenopiles.

Cette méthode ne permet pas de distinguer les cellules mortes par apoptose des cellules nécrosées.

Notes et références

1. ↑ Masse molaire calculée d’après Atomic weights of the elements 2007 sur www.chem.qmul.ac.uk.
2. ↑ ^{a et b} (en) « Bleu de trypan » sur NIST/WebBook, consulté le 12/05/2010
3. ↑ Toxicology and Applied Pharmacology. Vol. 23, Pg. 537, 1972. PMID
4. ↑ Naunyn-Schmiedebergs Archiv fuer Pharmakologie. Vol. 267, Pg. 31, 1970. PMID

Source

• Etudes de viabilité cellulaire
• Viable Cell Counts Using Trypan Blue

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