Hot Start

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Taq polymérase


La Taq polymérase (aussi appelée "Taq pol" ou simplement "Taq") est une enzyme, plus particulièrement une ADN polymérase qui agit dans une certaine gamme de température. Elle a été isolée à partir de la bactérie thermophile Thermus aquaticus en 1969(1). Sa demi-vie enzymatique à 95°C est de 40 minutes. Elle est dépourvue d'activité exonucléasique ce qui rend donc impossible la correction d'erreur lors de copie.

Elle est utilisée en biochimie afin de faire des réactions de PCR. Cette enzyme faisant une erreur chaque million de paire de base, l'amplicon (le produit de la réaction) sera utilisé pour analyse. Si l'on veut cloner le produit de réaction, alors on utilisera plutot une Pwo-polymérase ou une Pfu-polymérase, qui font moins d'erreurs.

Clonage A-T

La taq-polymérase ajoute une chaîne poly-A à la fin du fragment généré. Ceci permet de réaliser un clonage par bouts cohésifs avec un vecteur possédant des queues poly-T.

"Hot Start"

Désigne une enzyme ayant un inhibiteur (protéine chaperonne ou molécule chimique). Cet inhibiteur doit être enlevé par le biais d'un chauffage de l'enzyme à 95°C pendant 10 ou 15 minutes. On appelle cela l'activation de l'enzyme.

(1)Perl D et al., 2000. Two exposed amino acid residues confer thermostability on a cold shock protein. In: Nat. Struct. Biol.. 7, Nr. 5: 380-3.

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